黄青红1谢芝勋2李孟2李丹2罗思思2张民秀2谢丽基2余丹1

1.广西大学动物科学技术学院2.广西壮族自治区兽医研究所,广西兽医生物技术重点实验室,农业农村部中国-东盟(广西)跨境动物疫病防控重点实验室

摘要：为快速鉴别检测H3、N2和N8亚型禽流感病毒（Avian influenza virus, AIV）,建立了一种可同时检测H3、N2、N8亚型AIV的三重RT-LAMP（triplex reverse transcript loop-mediated isothermal amplification, tRT-LAMP）方法。根据NCBI中H3、N2和N8亚型AIV的NA基因保守序列分别设计3套LAMP引物，同时还设计了与FIP的F1c反向互补的荧光探针（FD）,并通过退火的方式将FD结合到标记淬灭基团的FIP（FIP*）上，形成FIP*-FD复合探针后的荧光被淬灭，当FD与FIP*分离后，可检测到荧光信号。通过优化反应温度、特异性、敏感性、干扰性和临床样品检测等成功建立了同时检测H3、N2、N8亚型AIV的tRT-LAMP方法。该方法只需要67℃恒温条件就能准确检测和鉴别AIV的3种不同目的基因，且检测其他相关的禽类病原时不产生非特异性扩增；每反应管检测H3、N2和N8亚型AIV最低限度分别为756、735、790 copies/μL,不同浓度模板之间互不干扰；临床样品检测结果显示，tRT-LAMP结果与RT-qPCR及测序结果完全一致。结果表明该方法具有快速、经济、灵敏和特异的优点，扩增结果还可直接肉眼观察，可应用于临床同时检测H3、N2和N8亚型禽流感病毒。

关键词： 三重荧光RT-LAMP;H3N8亚型禽流感;H3N2亚型禽流感;复合探针;

基金资助： 广西重点研发计划项目(桂科AB21076004)； 广西自然科学基金项目(2022GXNSFAA035445,2021GXNSFBA196031)； 广西八桂学者专项(2019-A50)； 广西基本科研业务费(桂科专项24-8)；

DOI： 10.16437/j.cnki.1007-5038.2025.02.007

专辑： 农业科技;基础科学

专题： 生物学;畜牧与动物医学

分类号： S852.65

在线公开时间： 2025-02-24