喻华英1,2曾婷婷2杨宗维3王粲2牙侯勋2万丽君2罗思思2李孟2谢芝勋2于美玲1谢丽基2

1.广西大学动物科学技术学院2.广西壮族自治区兽医研究所农业农村部中国(广西)-东盟跨境动物疫病防控重点实验室/广西兽医生物技术重点实验室3.桂林力源粮油食品集团有限公司

摘要：为满足基层实验室对K亚群禽白血病病毒（Avian leukosis virus subgroup K,ALV-K）检测需求，研究建立了一种基于重组酶聚合酶等温扩增-侧流层析试纸条（Recombinase polymerase amplifcation-lateral flow dipstick,RPA-LFD）的ALV-K快速检测方法。试验首先通过细胞培养分离鉴定出一株ALV-K，并以此分离株的前病毒DNA作为建立检测方法的模板；其次，针对ALV-K gp85基因保守位置设计引物和探针，优化反应体系的引物浓度、探针浓度和反应温度，在此基础上进行敏感性预试验并以预试验检测限优化反应时间；最后，以优化反应时间进行敏感性试验、稳定性试验及特异性试验。结果显示：建立的ALV-K RPA-LFD反应体系在引物浓度为0.45 mmol/L，探针浓度为0.14 mmol/L,39℃条件下反应21 min，其检测限为4.86×10～2 copies/反应的ALV-K DNA，并且不与其他常见禽类病原体核酸发生非特异扩增反应；30份临床病料中有14份ALV-K阳性，与单重PCR方法结果一致。研究表明，建... 更多

关键词： 家禽;K亚群禽白血病病毒;重组酶聚合酶等温扩增-侧流层析试纸条;快速检测;

基金资助： 广西科技重大专项（桂科AA23062050）； 国家现代农业产业技术体系广西家禽产业创新团队建设专项资金资助（nycytxgxcxtd-2024-19-3）； 广西八桂学者专项（2019A50）；

专辑： 基础科学;农业科技

专题： 生物学;畜牧与动物医学

分类号： S852.65

在线公开时间： 2025-03-06