周颖1,2陈忠伟1段群棚1,2程珂2,3林昌华2,4许艺兰1张胜斌4覃国喜3许心婷1杨讯业1秦毅斌1,2赵硕1,2全琛宇1陈婷婷1徐悦1,2何颖1卢冰霞1
1.广西壮族自治区兽医研究所/广西兽医生物技术重点实验室/农业农村部中国(广西)-东盟跨境动物疫病防控重点实验室2.广西大学动物科学技术学院3.广西农垦永新畜牧集团金光有限公司4.广西农垦永新畜牧集团西江有限公司
摘要：为了明确猪肺炎支原体（Mycoplasma hyopneumoniae,Mhp）体外感染猪肺泡巨噬细胞是否会诱导细胞发生氧化应激反应，并初步揭示相关机制，试验分别用5×10～6,1×10～7,2×10～7,5×10～7 CCU/mL Mhp感染猪肺泡巨噬细胞，以未感染Mhp的细胞为对照，并分别于第6,12,18,24,36小时收集细胞，检测氧化应激相关指标[活性氧（reactive oxygen species, ROS）水平、一氧化氮（nitric oxide, NO）浓度、丙二醛（malondialdehyde, MDA）含量、还原型一氧化氮合成酶（induciblenitric oxide synthase, iNOS）和总超氧化物歧化酶（total superoxide dismutase, T-SOD）活性];根据氧化应激相关指标的测定结果，选择氧化应激水平最明显的感染浓度和时间点，采用荧光定量PCR方法检测氧化应激通路相关因子{核因子E2相关因子2（nuclear factor erythroid-2-related factor2, Nrf2）、Kelch样环氧氯丙烷相关蛋白1（Kelch-like ECH-associated protein 1, Keap1）、磷酸酰胺腺嘌呤二核苷酸醌氧化还原酶-1[NAD（P）H:quinoneoxidoreductase-1, NQO1]、血红素加氧酶-1（heme oxygenase-1, HO-1）}的mRNA表达水平，并采用Western-blot方法检测上述因子的蛋白表达水平。结果表明：与正常细胞比较，4个浓度的Mhp感染细胞中ROS水平在第6,12,18,24,36小时均显著升高（P<0.05）;5×10～6CCU/mL Mhp感染细胞的NO浓度仅在第24小时显著升高（P<0.05）,1×10～7 CCU/mL Mhp感染细胞的NO浓度在第6,12,18小时显著升高（P<0.05）,2×10～7 CCU/mL和5×10～7 CCU/mL Mhp感染细胞的NO浓度在第6,12,18,24小时显著升高（P<0.05）;5×106 CCU/mL Mhp感染细胞的MDA含量仅在第36小时显著升高（P<0.05）,1×10～7 CCU/mL Mhp感染细胞的MDA含量在第24,36小时显著升高（P<0.05）,2×10～7 CCU/mL Mhp感染细胞的MDA含量在第6,12,18,36小时显著升高（P<0.05）,5×10～7 CCU/mL Mhp感染细胞的MDA含量在第6,18,24小时显著升高（P<0.05）;5×10～6 CCU/mL Mhp感染细胞的iNOS活性在第6,12,24,36小时显著升高（P<0.05）,1×10～7 CCU/mL Mhp感染细胞iNOS活性在第6,12,18,24,36小时均显著升高，2×10～7,5×10～7CCU/mL Mhp感染细胞iNOS活性在第12,18,24,36小时显著升高（P<0.05）;4个浓度Mhp感染细胞的T-SOD活性在第6,12,24,36小时均差异不显著（P>0.05）;2×10～7CCU/mL Mhp感染细胞第18小时Nrf2 mRNA和蛋白的表达水平均差异不显著（P>0.05）,Keap1 mRNA的表达水平显著降低（P<0.05）但蛋白的表达水平差异不显著（P>0.05）,NQO1 mRNA的表达水平差异不显著（P>0.05）但蛋白的表达水平显著提高（P<0.05）,HO-1 mRNA的表达水平显著降低（P<0.05）但蛋白的表达水平显著提高（P<0.05）。说明Mhp感染猪肺泡巨噬细胞后可能激活Nrf2-Keap1信号通路，引起氧化应激反应。
关键词： 猪肺炎支原体;氧化应激;核因子E2相关因子2;活性氧;Kelch样环氧氯丙烷相关蛋白1;血红素加氧酶-1;
基金资助： 广西现代农业产业技术体系生猪产业创新团队项目(nycytxgxcxtd-2023-15-02)； 南宁市科学研究与技术开发计划项目(20232039)； 广西基本科研业务费专项(桂科专项23-4)； 广西畜牧产业科技先锋队项目(桂农科盟202409-01-3)； 广西农业科技自筹经费项目(Z2023033;Z202222)；
DOI： 10.13881/j.cnki.hljxmsy.2024.09.0024
专辑： 农业科技
专题： 畜牧与动物医学
分类号： S858.28
在线公开时间： 2025-04-17 18:09