赵俊柯1,2余丹1,2尹文巧1,2张艳芳2谢志勤2范晴2喻华英1,2谢芝勋2

1.广西大学动物科学技术学院2.广西壮族自治区兽医研究所农业农村部中国(广西)-东盟跨境动物疫病防控重点实验室/广西兽医生物技术重点实验室

摘要：为建立一种能鉴别鸡星状病毒(chicken astrovirus, CAstV)和禽肾炎病毒(avian nephritis virus, ANV)的二重荧光RT-LAMP,该研究对比GenBank中下载的CAstV ORF1b基因和ANV ORF1b基因保守序列，分别设计了2套特异性引物和标记荧光基团的探针。在CAstV探针3′端标记FAM荧光基团，5′端标记淬灭基团BHQ1;ANV探针3′端标记CY3荧光基团，5′端标记淬灭基团BHQ2,通过试验筛选出最适引物和探针浓度并进行反应条件的优化。用建立的二重荧光RT-LAMP进行特异性、敏感性、重复性和干扰性试验，并对采集自广西南宁不同地区的临床样品共300份进行检测，结果与RT-qPCR和RT-PCR比较，验证该方法的有效性。试验结果显示：建立的二重荧光RT-LAMP方法60 min即可反应结束，最适反应温度为65℃;设计的引物仅能检测CAstV和ANV,而对其他病源无交叉反应；CAstV最低检测限度为1.4×10～2 copies/μL,ANV最低检测限度为1.5×10～2 copies/μL,且干扰性试验和重复性试验良好；检测结果

与RT-qPCR相比，CAstV和ANV检测结果符合率分别为97.97%和98.85%。综上所述，该研究建立的二重荧光RT-LAMP方法具有快速、准确、特异性好、灵敏性高、重复性好等特点，适用于临床诊断，为CAstV和ANV的流行病学调查提供技术支持。

关键词： 鸡星状病毒;禽肾炎病毒;可视化;RT-LAMP;鉴别诊断;

基金资助： 广西科技基地和人才专项资助项目(桂科AD17195083)； 广西兽医生物技术重点实验室自主研究基金资助项目(24-035-32-A-01)； 桂农科盟基金资助项目(202409-01)； 广西八桂学者专项资助项目(2019A50)；

DOI： 10.16303/j.cnki.1005-4545.2025.02.05

专辑： 农业科技;基础科学

专题： 生物学;畜牧与动物医学

分类号： S852.65

在线公开时间： 2025-02-28