刘磊1，2，秦毅斌1，陈忠伟1，赵武1，段群棚1，全琛宇1，赵硕1，许心婷1，陈婷婷1，梁家幸1，周英宁1，许艺兰1，李斌1，蒋冬福1，卢敬专1，何颖1 ，卢冰霞1

1.广西兽医研究所 广西兽医生物技术重点实验室，广西南宁530001；

2.广西农业职业技术大学，广西南宁530007

中国兽医科学2022，52(11)：1347-1354, DOI：10.16656/j

摘要： 为建立快速、准确的猪丁型冠状病毒（PDCoV ）抗体ELISA 检测方法，本研究以重组蛋白N 作为包被抗原，建立了PDCoV 间接ELISA 抗体检测方法。结果显示，经条件筛选，确定了该ELISA 最佳反应条件：重组蛋白每孔包被0.2μg；待检血清1 ∶ 80 稀释，孵育60 min；酶标二抗1 ∶ 4 000 稀释，反应30 min；底物显色10 min。待检血清样品S/P 值＞0.200时判定为阳性，S/P 值＜0.173时判定为阴性，S/P 值介于0.173和0.200之间则判为可疑。特异性试验结果表明，该检测方法不与HCV 、FMDV 、PRRSV 、PRV 、TGEV 和PEDV的阳性血清发生交叉反应；重复性试验结果显示，批内变异系数为0.79％～4.75％，批间变异系数在1.92％～6.60％之间，表明重复性良好；敏感性试验结果显示，该方法可检测到血清最大稀释度为1 ∶ 320。符合率试验结果显示，本方法与中和试验检测结果符合度高，阳性符合率、阴性符合率和总符合率分别为86.36％、96.43％和92.00％。利用本研究建立的ELISA 方法对456 份采自广西地区不同阶段猪群的血清样品进行检测，结果显示，总体样品阳性率为40.40％，不同阶段猪群抗体阳性率有较大区别，后备母猪的阳性率可高达100％，保育猪阳性率最低仅为3.90％。

关键词： 猪丁型冠状病毒；N 蛋白；间接ELISA

基于猪丁型冠状病毒重组蛋白...A检测方法的建立与初步应用.pdf